Sobald die Zellen, in denen wir kultivieren,

Zellfabriksind kontaminiert, die meisten von ihnen sind schwer zu handhaben.Wenn es sich bei den kontaminierten Zellen um wertvolle und schwer wieder zu gewinnende Zellen handelt, können die folgenden Methoden zur Entfernung angewendet werden.

1. Verwenden Sie Antibiotika

Antibiotika töten Bakterien wirksamer abZellfabriken.Kombinationsmedikamente sind wirksamer als Medikamente allein.Vorbeugende Medikamente sind wirksamer als Medikamente nach einer Kontamination.Vorbeugende Medikamente verwenden im Allgemeinen ein Doppelantibiotikum (Penicillin 100 μg/ml plus Streptomycin 100 μg/ml).Nach einer Kontamination muss die Reinigungsmethode 5 bis 10 Mal größer sein als die übliche Menge.Das Medikament sollte nach der Zugabe 24 bis 48 Stunden lang verwendet und dann durch die übliche Routine ersetzt werden.Kulturflüssigkeit.Diese Methode kann in den frühen Stadien der Kontamination wirksam sein.Zu den verwendeten Antibiotika können neben Penicillin und Streptomycin auch Gentamicin, Kanamycin, Polymyxin, Tetracyclin, Nystatin usw. gehören. Üblicherweise werden 400 bis 800 μg/ml Kanamycin oder 200 μg/ml Tetracyclin verwendet.Das Medium wird alle 2 bis 3 Tage gewechselt und über 1 bis 2 Generationen zur Behandlung weitergegeben.In den letzten Jahren wurde berichtet, dass 4-Fluor, 2-Hydroxychinolin (Ciprofloxacin, Cip), Pleu-Romutilin-Derivat (Pleu-Romutilin-Derivat, BM-Cyclin2: BM-1 und Tetracyclin-Derivat (BM-2)) Antibiotika sind wirksam bei der Abtötung von Mykoplasmen, wenn es allein oder in Kombination verwendet wird.Diese drei Antibiotika werden alle in 250-fach konzentrierten Lösungen in PBS zubereitet und zur späteren Verwendung bei -20 °C gelagert.Die Anwendungskonzentration Cip beträgt 10 μg/ml, BM-1 beträgt 10 μg/ml und BM-2 beträgt 5 μg/ml.Bei der Verwendung zuerst das kontaminierte Kulturmedium absaugen, RPMI1640-Kulturmedium mit BM-1 hinzufügen, dann das Kulturmedium nach 3 Tagen absaugen, RPMI1640-Kulturmedium mit BM-2 hinzufügen und 4 Tage lang kultivieren usw. an 3 aufeinanderfolgenden Tagen .Runden, bis durch 33258-Färbungsmikroskopie nachgewiesen ist, dass Mykoplasmen eliminiert wurden, dann wird normales Kulturmedium für die Kultur und Passage 3-4 Mal zugegeben.

2. Wärmebehandlung

Die 18-stündige Inkubation einer kontaminierten Gewebekultur bei 41 °C kann Mykoplasmen abtöten, hat jedoch negative Auswirkungen auf die Zellen.Daher sollte vor der Behandlung ein vorläufiger Test durchgeführt werden, um die Erhitzungszeit zu ermitteln, die Mykoplasmen maximal abtöten kann und die geringste Auswirkung auf die Zellen hat.Diese Methode ist manchmal unzuverlässig.Wenn man es zuerst mit Medikamenten behandelt und dann auf 41°C erhitzt, ist die Wirkung besser.

3. Verwenden Sie Mykoplasmen-spezifisches Serum

Eine Mykoplasmenkontamination kann mit 5 %igem Kaninchen-Mykoplasmen-Immunserum (Hämagglutinationstiter 1:320 oder höher) entfernt werden.Da der spezifische Antikörper das Wachstum von Mykoplasmen hemmen kann, wird er 11 Tage nach der Antiserumbehandlung negativ und bleibt auch 5 Monate später negativ.ist negativ.Diese Methode ist jedoch aufwändiger und nicht so bequem und wirtschaftlich wie der Einsatz von Antibiotika.

4. Andere Methoden

Zusätzlich zu den oben genannten Methoden zur Entfernung von Kontaminationen gibt es auch Methoden zur Inokulation und Sterilisation bei Tieren, Methoden zur Makrophagen-Phagozytose und Methoden zur Zugabe von Bromouracil zu KontaminiertenKulturflaschenund die anschließende Bestrahlung mit Licht, Filtermethoden usw., aber sie sind alle problematischer und ineffektiver.Sobald eine Mykoplasmenkontamination auftritt, wird sie daher im Allgemeinen verworfen und erneut kultiviert, es sei denn, sie ist von besonders wichtigem Wert.

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